Он родился в Киевской губернии в семье полкового сотского Саввы Туптало.
При рождении был назван Даниилом.
В молодости постригся в монахи и получил имя Димитрия.
Вскоре его проповеди и учёность обратили на себя внимание, и ему было поручено составление Жития святых, или Четьи-Миней.
Пётр I, который всюду искал умных, энергичных людей, вызвал Димитрия в Москву и определил его ростовским митрополитом.
Став митрополитом, Димитрий открыл в Ростове училище, занимался литературной деятельностью.
Помимо Жития, которые составили 4 больших тома, он сочинял стихотворные кантаты для домашнего пения.
Димитрий Ростовский похоронен в монастыре.
Вскоре он был причислен к лику святых, и в 1757 произошло обретение его мощей (в честь этого события небольшая Темерницкая крепость на юге России переименована в Ростовскую, а населённый пункт при ней в 1796 преобразован в город с названием Ростов-на-Дону).
На открытие мощей приезжала императрица, что привлекло к монастырю столичную аристократию, придав ему известность.